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                      反相高效液相色譜緩沖體系PH的選定

                      來源:杭州賽析科技有限公司   時間:-0-0    瀏覽量:79

                      反相高效液相色譜緩沖體系PH的選定

                         反相高效液相色譜中緩沖體系PH值的選擇在反相高效液相色譜分析中,選擇正確的緩沖液PH值,對可離解的化合物分析的重現性十分重要,不恰當的PH值可能導致不對稱峰,寬峰,分裂峰或肩峰,而尖銳的,對稱的峰是定量分析中獲得低的檢測限以,兩次分析之間較低的相對標準偏差(RSD)和保留時間的高重現性的前提。我們將討論在使用緩沖液時如何選擇緩沖液的PH值,以及如何選擇正確的緩沖體系。

                      什么時候需要緩沖溶液?
                         在反相液相色譜分析中,流動相的PH值一般在2.5-7之間,當被分析物在反相條件下可離解,或樣品的PH值在2.5-7之外時,就需要緩沖液。在反相條件下可離解的化合物一般都有氨基和羧基,他們的Pka在1-11之間,選擇正確的緩沖液PH值可保證可離解的官能團以一種形式存在,離子形式或中性化合物的形式。如果樣品的PH值對柱子有傷害,則緩沖溶液可使其變溫和從而減小其危害。

                      如何選擇緩沖液PH值
                         在選擇緩沖液PH值之前,應先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個PH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從HH公式:PH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液PH值高于或低于Pka兩個單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。

                         當化合物只有氨基時,緩沖體系的選擇十分簡單,大多數氨基化合物在PH值小于9時都被質子化,所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應用,你也許會問水的PH值大約是7,為什么還用緩沖鹽,因為緩沖鹽有助于增加方法的可*性,以及色譜峰的尖銳性,PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱,減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用,而使峰更尖銳,從表1 可值,任何緩沖液均可應用于氨基化合物的分析,但我們認為PH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物的分析。
                         在上面兩個例子中,PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應用,在一般情況下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的緩沖液,并且我們認為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。

                      為離子對試劑選擇緩沖液
                         為應用離子對試劑的方法選擇緩沖液的過程是相似的,離子對試劑例如四丁基銨的鹽,十四烷基磺酸鈉等,在流動相中可與化合物中可離解的官能團配對,在緩沖液中以離子形式存在的化合物就需要應用離子對試劑。

                      應用緩沖液PH值來調節方法選擇性
                         如前面提到的,氨基化合物的保留隨PH的減小而降低,這個特性可以用來調節方法的選擇性,如果兩個化合物共流出,一個含有氨基,適當改變PH值就可以用來分離這一物質對。由于可離解化合物的選擇性依*PH值,所以變化PH值也可以用來鑒別未知化合物的官能團,如果PH值變小,出峰便快,則化合物中可能存在氨基,當PH變大,化合物出峰很快,或流出在死時間處,化合物可能是一種羧酸,因為羧基離子化后流出大大快于比質子化的中性化合物。

                      總結
                          正確選擇緩沖溶液在反相液相色譜方法中對于優化尖峰,撿出限,以及獲得穩定的保留時間十分重要,如果你知道化合物官能團信息和化合物的Pka值這一過程將十分簡單。

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